簡要描述:β木糖苷酶測試盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實驗室產(chǎn)品,β-木糖苷酶(β- xylosidase)測定試劑盒
詳細介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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應用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 |
β木糖苷酶測試盒
注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細菌和真菌等生物體,是催化木聚糖類半纖維素降解的關(guān)鍵酶,產(chǎn)物木糖可作為碳源應用于微生物發(fā)酵。另外,β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應用于造紙工業(yè),比傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保,具有廣泛的應用價值。
測定原理:
β-木糖苷酶催化對硝基苯酚-β-D-木糖苷產(chǎn)生對硝基苯酚,對硝基苯酚在405nm處有特征吸收峰,測定405nm光吸收增加速率,可計算β-木糖苷酶活性。
自備實驗用品及儀器:
天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體1mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體10mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體10mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提?。?/p>
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿,然后10000g,4℃,離心20min,取上清待測。
細菌、真菌:按照細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
液體:直接檢測。
測定操作表:
分光光度計/酶標儀預熱30min,調(diào)節(jié)波長至405nm。
操作表
對照管 | 測定管 | |
酶液(μL) | 40 | 40 |
試劑一(μL) | 10 | |
試劑二(μL) | 80 | 70 |
混勻,45℃水浴20min | ||
試劑三(μL) | 80 | 80 |
混勻,靜置5min,405nm處測定吸光值A(chǔ),計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設一個對照管。 |
β-木糖苷酶活性計算公式:
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線:y=13.226x+0.0011,R2=0.9998;x為標準品濃度(μmol/mL),y為吸光值ΔA。
1、按蛋白濃度計算
酶活定義:45℃,pH7.4時每毫克蛋白1min內(nèi)催化產(chǎn)生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/ mg prot)=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反總÷(V樣×Cpr)÷T×1000
= 11.34×(ΔA -0.0011)÷ Cpr
2、按樣本質(zhì)量計算:
酶活定義:45℃,pH7.4時每克樣品1min內(nèi)催化產(chǎn)生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/g 鮮重)=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T×1000= 11.34×(ΔA-0.0011)÷W
3. 按細胞數(shù)量計算:
酶活定義:45℃,pH7.4時每104個細胞1min內(nèi)催化產(chǎn)生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/104cell)=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反總÷V樣×V樣總÷細胞數(shù)量(萬個)÷T×1000=11.34×(ΔA-0.0011) ÷ 細胞數(shù)量(萬個)
(4)按液體體積計算
酶活定義:45℃,pH7.4時每毫升液體1min內(nèi)催化產(chǎn)生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/ mL)=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反總÷V樣÷T×1000
=11.34×(ΔA-0.0011)
V樣總:加入提取液體積,1mL; V反總:反應總體積,0.12mL;V樣:反應中樣品體積,0.04mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量,g;T:反應時間,20min;1000:1μmol/L=1000nmol/L
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線:y=6.613x+0.0011,R2=0.9998;x為標準品濃度(μmol/mL),y為吸光值ΔA
1、按蛋白濃度計算
酶活定義:45℃,pH7.4時每毫克蛋白1min內(nèi)催化產(chǎn)生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/ mg prot)=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V反總÷(V樣×Cpr)÷T×1000
= 22.68×(ΔA -0.0011)÷ Cpr
2、按樣本質(zhì)量計算:
酶活定義:45℃,pH7.4時每克樣品1min內(nèi)催化產(chǎn)生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/g 鮮重)=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T×1000= 22.68×(ΔA-0.0011)÷W
3. 按細胞數(shù)量計算:
酶活定義:45℃,pH7.4時每104個細胞1min內(nèi)催化產(chǎn)生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/104cell)=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V反總÷V樣×V樣總÷細胞數(shù)量(萬個)÷T×1000=22.68×(ΔA-0.0011) ÷ 細胞數(shù)量(萬個)
(4)按液體體積計算
酶活定義:45℃,pH7.4時每毫升液體1min內(nèi)催化產(chǎn)生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/ mL)=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V反總÷V樣÷T×1000
=22.68×(ΔA-0.0011)
V樣總:加入提取液體積,1mL; V反總:反應總體積,0.12mL;V樣:反應中樣品體積,0.04mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量,g;T:反應時間,20min;1000:1μmol/mL=1000nmol/mL
ΔA控制在0.01-1范圍內(nèi),若ΔA大于1,可適當減小樣本量。
標準曲線線性范圍為:0.01μmol/mL-0.5μmol/mL。
上海牧榮生物科技有限公司
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