簡(jiǎn)要描述:β淀粉酶測(cè)試盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品,β-淀粉酶(β-amylase,β-AL)試劑盒
詳細(xì)介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 |
β淀粉酶測(cè)試盒
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
淀粉酶負(fù)責(zé)水解淀粉,主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)可隨機(jī)地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵,生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖。
測(cè)定原理:
還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì)。α-淀粉酶不耐酸,β-淀粉酶不耐熱。根據(jù)上述特性,鈍化其中之一,就可測(cè)出另一種淀粉酶的活力。
需自備的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:30mL×1瓶,常溫保存,若有黃色晶體析出,需90℃加熱溶解后再用;
試劑二:15mL×1瓶,4℃保存,若出現(xiàn)沉淀析出,需70℃加熱溶解后再用。
粗酶液提?。?/p>
組織:稱取0.1~0.2g樣本(建議稱取約0.1g樣本),加入1mL蒸餾水,研磨勻漿;將勻漿倒入離心管中,提取液在室溫下放置提取15min,每5min振蕩1次,使其充分提取;3000g,25℃離心10min,取上清液加蒸餾水定容至10 mL,搖勻,即淀粉酶原液。
吸取上述淀粉酶原液1mL,加入4mL蒸餾水,搖勻,即為淀粉酶稀釋液,用于(α+β)淀粉酶總活力的測(cè)定。
血清(漿)等液體樣本:(1)直接檢測(cè)α-淀粉酶。(2)吸取淀粉酶原液1mL,加入4mL蒸餾水,搖勻,即為淀粉酶稀釋液,用于(α+β)淀粉酶總活力的測(cè)定。
測(cè)定步驟:
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到540 nm,蒸餾水調(diào)零。
2、試劑一和試劑二40℃預(yù)熱10min.
3、測(cè)定操作表:
試劑名稱(μL) | α淀粉酶活力測(cè)定 | 總淀粉酶活力測(cè)定 | ||
對(duì)照管 | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 | 測(cè)定管 | |
淀粉酶原液 | 75 | 75 |
70℃水浴15min左右,冷卻
淀粉酶稀釋液 | 75 | 75 | ||
蒸餾水 | 75 | 75 | ||
試劑二 | 75 | 75 |
40℃恒溫水浴中準(zhǔn)確保溫5min
試劑一 | 150 | 150 | 150 | 150 |
混勻,95度水浴5min,冷卻,取200μL 至微量石英比色皿或96孔板中,540nm處讀取吸光值,從左到右分別記為A1、A2、A3和A4。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
酶活性計(jì)算:
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸曲線為y=3.7215x -0.1778; x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y為吸光值。
2、α淀粉酶活性
(1)按照樣本質(zhì)量計(jì)算
單位定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個(gè)酶活力單位。
α淀粉酶活性(mg/min/g鮮重)=[(A2-A1+0.1778)÷3.7215×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=1.075×(A2-A1+0.1778)÷W
(2)按照蛋白質(zhì)含量計(jì)算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個(gè)酶活性單位。
α淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(A2-A1+0.1778)÷3.7215×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=0.1075×(A2-A1+0.1778) ÷Cpr
(3)血清(漿)等液體樣本中α淀粉酶活性計(jì)算
單位定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個(gè)酶活性單位。
α淀粉酶活性(mg/min/mL)= [(A2-A1+0.1778)÷3.7215×V反總]÷V樣÷T=0.1075×(A2-A1+0.1778)
3、總淀粉酶活性計(jì)算
(1)按照樣品質(zhì)量計(jì)算
單位定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個(gè)酶活力單位。
總淀粉酶活性(mg/min//g鮮重)=5×[(A4-A3+0.1778)÷3.7215×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=5.375×(A4-A3+0.1778)÷W
(2)按照蛋白質(zhì)含量計(jì)算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個(gè)酶活力單位。
總淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=5×[(A4-A3+0.1778)÷3.7215×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=0.5375×(A4-A3+0.1778) ÷Cpr
(3)血清(漿)等液體樣本中總淀粉酶活性計(jì)算
單位定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個(gè)酶活性單位。
總淀粉酶活性(mg/min/mL) =5×[(A4-A3+0.1778)÷3.7215×V反總]÷V樣÷T
=0.5375×(A4-A3+0.1778)
4、β-淀粉酶活性計(jì)算
(1)按照樣本質(zhì)量計(jì)算
單位定義:每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個(gè)酶活力單位。
β-淀粉酶活性(mg/min/g鮮重)=淀粉酶總活性-α-淀粉酶活性=[5.375×(A4-A3+0.1778)-1.075×(A2-A1+0.1778)]÷W
(2)按照蛋白質(zhì)含量計(jì)算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個(gè)酶活力單位。
β-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=淀粉酶總活性-α-淀粉酶活性=[0.5375×(A4-A3+0.1778)-0.1075×(A2-A1+0.1778)]÷Cpr
(3)血清(漿)等液體樣本中β-淀粉酶活性計(jì)算
單位定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個(gè)酶活性單位。
β-淀粉酶活性(mg/min/mL)=淀粉酶總活性-α-淀粉酶活性=0.5375×(A4-A3+0.1778)-0.1075×(A2-A1+0.1778)
5:總淀粉酶稀釋倍數(shù);V反總:反應(yīng)體系總體積,0.15mL;V樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.075 mL;V樣總:提取液總體積,10 mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,5min。
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸曲線為y=2.481x -0.1778; x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y為吸光值。
2、α淀粉酶活性
(1)按照樣本質(zhì)量計(jì)算
單位定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個(gè)酶活力單位。
α淀粉酶活性(mg/min/g鮮重)=[(ΔA+0.1778)÷2.481×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=1.612×(ΔA+0.1778)÷W
(2)按照蛋白質(zhì)含量計(jì)算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個(gè)酶活性單位。
α淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=[(ΔA+0.1778)÷2.481×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T =0.1612×(ΔA+0.1778) ÷Cpr
(3)血清(漿)等液體樣本中α淀粉酶活性計(jì)算
單位定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個(gè)酶活性單位。
α淀粉酶活性(mg/min/mL)=[(ΔA+0.1778)÷2.481×V反總]÷V樣÷T =0.1612×(ΔA+0.1778)
3、總淀粉酶活性計(jì)算
(1)按照樣本質(zhì)量計(jì)算
單位定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個(gè)酶活力單位。
總淀粉酶活性(mg/min/g鮮重)=5×[(A4-A3+0.1778)÷2.481×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=8.06×(ΔA+0.1778)÷W
(2)按照蛋白質(zhì)含量計(jì)算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個(gè)酶活力單位。
總淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=5×[(A4-A3+0.1778)÷2.481×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=0.806×(A4-A3+0.1778) ÷Cpr
(3)血清(漿)等液體樣本中總淀粉酶活性計(jì)算
單位定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個(gè)酶活性單位。
總淀粉酶活性(mg/min/mL)=5×[(A4-A3+0.1778)÷2.481×V反總]÷V樣÷T
=0.806×(A4-A3+0.1778)
4、β-淀粉酶活性計(jì)算
(1)按照樣本質(zhì)量計(jì)算
單位定義:每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個(gè)酶活力單位。
β-淀粉酶活性(mg/min/g鮮重)=淀粉酶總活性-α-淀粉酶活性=[8.06×(A4-A3+0.1778)-1.612×(A2-A1+0.1778)]÷W
(2)按照蛋白質(zhì)含量計(jì)算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個(gè)酶活力單位。
β-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=淀粉酶總活性-α-淀粉酶活性=[0.806×(A4-A3+0.1778)-0.1612×(A2-A1+0.1778)]÷Cpr
(3)血清(漿)等液體樣本中β-淀粉酶活性計(jì)算
單位定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個(gè)酶活性單位。
β-淀粉酶活性(mg/min/mL)=淀粉酶總活性-α-淀粉酶活性=0.806×(A4-A3+0.1778)-0.1612×(A2-A1+0.1778)
5:總淀粉酶稀釋倍數(shù);V反總:反應(yīng)體系總體積,0.15mL;V樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.075 mL;V樣總:提取液總體積,10 mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,5min。
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