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單寧酶(TAN)測試盒

簡要描述:單寧酶(TAN)測試盒 單寧酶(Tannase,TAN)試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品.為客戶全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開發(fā)需求,提供方便、快捷的服務(wù)。

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):代理商
  • 更新時(shí)間:2024-05-07
  • 訪  問  量:150

詳細(xì)介紹

品牌其他品牌供貨周期現(xiàn)貨
應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥

單寧酶(TAN)測試盒

微量法100管/48樣

正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義

單寧酶全稱是單寧酯酰水解酶(Tannase,EC 3.1.1.20),它可以水解沒食子酸單寧中的酯鍵和縮酚羧鍵,生成沒食子酸和葡萄糖。

測定原理

使用抗氧化劑沒食子酸丙酯(PG)作為單寧酶酶促反應(yīng)的底物,在270nn下測定底物PG反應(yīng)前后的光密度變化,計(jì)算單寧酶酶活力。

需自備的的儀器和用品

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔UV、研缽、冰、蒸餾水

試劑的組成和配制

試劑一:液體100mL×2瓶,4℃保存;

試劑二:粉劑×1支,4℃保存;臨用前每支加入6mL試劑一,充分溶解后備用;用不完的試劑4℃保存;

粗酶液提取 

按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一),進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

液體樣本:直接取上清測定。

測定步驟

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長到270 nm,蒸餾水調(diào)零。

2、加樣表

試劑名稱(μL)

對(duì)照管

測定管

95℃水浴5min后滅活的粗酶液

50


粗酶液


50

試劑二

50

50

混勻,40℃準(zhǔn)確保溫10 min后,置95℃水浴中10 min(蓋緊,防止水分散失),冷卻

試劑一

900

900

混勻,取200uL至微量石英比色皿或96孔UV板中,270nm處讀取各管吸光值。計(jì)算ΔA=A對(duì)照-A測定。每個(gè)測定管需設(shè)個(gè)一個(gè)對(duì)照管。

注意:

  1. 可以在不同對(duì)照管中加入不同樣品的粗酶液,然后集中進(jìn)行5min 95℃沸水浴處理。

  2. 務(wù)必使用96孔UV板(非普通酶標(biāo)板,普通酶標(biāo)板只能透過可見光,不能透過紫外光,檢測波長小于340nm務(wù)必使用UV板)。

TAN活力單位的計(jì)算

a.用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為y = 0.0058x + 0.0044,R2 = 0.9994;x為PG含量(µmol/L),y為吸光值。

  1. 按樣本體積計(jì)算

單位的定義:40℃下每毫升粗酶液每分鐘水解減少0.01µmol底物PG所需要的酶量定義為一個(gè)酶活單位。

TAN活性(µmol/min/mL)=(ΔA-0.0044)÷0.0058÷1000×V反總÷0.01÷V樣÷T

=34.48×( ΔA-0.0044)

2、按照蛋白濃度計(jì)算

單位的定義:40℃下每毫克蛋白每分鐘水解減少0.01µmol底物PG所需要的酶量定義為一個(gè)酶活單位(U)。

TAN活性((µmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0044)÷0.0058÷1000×V反總÷0.01÷(V樣×Cpr)÷T

=34.48×(ΔA-0.0044)÷Cpr

3、按照樣本鮮重計(jì)算

單位的定義:40℃下每克樣品每分鐘水解減少0.01µmol底物PG所需要的酶量定義為一個(gè)酶活單位(U)。

TAN活性(µmol/min/g 鮮重)=(ΔA-0.0044)÷0.0058÷1000×V反總÷0.01÷(V樣÷V樣總×W)÷T

=34.48×(ΔA-0.0044)÷W

V反總:反應(yīng)體系總體積,1mL; V樣:加入樣本體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,10min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g。

b.用96孔板測定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為y = 0.0029x + 0.0044,R2 = 0.9994;x為PG含量(µmol/L),y為吸光值。

1、按樣本體積計(jì)算

單位的定義:40℃下每毫升粗酶液每分鐘水解減少0.01µmol底物PG所需要的酶量定義為一個(gè)酶活單位(U)。

TAN活性(µmol/min/mL)=(ΔA-0.0044)÷0.0029÷1000×V反總÷0.01÷V樣÷T

=68.97×( ΔA-0.0044)

2、按照蛋白濃度計(jì)算

單位的定義:40℃下每毫克蛋白每分鐘水解減少1µmol底物PG所需要的酶量定義為一個(gè)酶活單位(U)。

TAN活性(µmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0044)÷0.0029÷1000×V反總÷0.01÷(V樣×Cpr)÷T

=68.97×( ΔA-0.0044)÷Cpr

3、按照樣本鮮重計(jì)算

單位的定義:40℃下每克樣品每分鐘水解減少0.01µmol底物PG所需要的酶量定義為一個(gè)酶活單位(U)。

TAN活性(µmol/min/g 鮮重)=(ΔA-0.0044)÷0.0029÷1000×V反總÷0.01÷(V樣÷V樣總×W)÷T

=68.97×( ΔA-0.0044)÷W

V反總:反應(yīng)體系總體積,1mL; V樣:加入樣本體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,10min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g。


上海牧榮生物科技有限公司

  1. 國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

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  6. 質(zhì)量保證,所有產(chǎn)品都提供售后服務(wù)。付款方式靈活。公司堅(jiān)持“一站式"服務(wù)模式,為客戶全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開發(fā)需求。公司整合國際與國內(nèi)資源,加強(qiáng)網(wǎng)絡(luò)建設(shè),提高公司內(nèi)部運(yùn)作效率,為客戶提供方便、快捷的服務(wù)。

  7. 公司突出創(chuàng)新思維,提高工作效能,減低運(yùn)作成本,為客戶提供優(yōu)惠的價(jià)格。

單寧酶(TAN)測試盒




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