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品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
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應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產業(yè),農業(yè),制藥 |
二胺氧化酶(DAO)測試盒
微量法100T/48S
注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
DAO(EC1.4.3.6)廣泛存在于動物(腸粘膜、肺、肝臟、腎臟等)、植物和微生物中。催化多胺氧化為醛,其活性與核酸和蛋白合成密切相關,能夠反映腸道機械屏障的完整性和受損傷程度。
測定原理:
DAO催化尸胺產生醛和過氧化氫,外源添加過量的辣根過氧化物酶,催化過氧化氫氧化鄰聯茴香胺生成氧化型鄰聯茴香胺,在460nm處有特征吸收峰,通過測定該波長吸光度增加速率,計算DAO活性。
自備實驗用品及儀器:
天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體120mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體0.3mL×1支,4℃保存。
試劑二:液體2.5mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體1.2mL×1管,4℃保存。
粗酶液提?。?/p>
組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿,然后10000g,4℃離心20min,取上清,置冰上待測。
細菌、真菌:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
血清等液體:直接測定。
測定操作表:
1、分光光度計/酶標儀預熱30min,調節(jié)波長至460nm,蒸餾水調零。
2、操作表
對照管 | 測定管 | |
粗酶液(μL) | 50 | 50 |
提取液(μL) | 128 | 108 |
試劑一(μL) | 2 | 2 |
試劑二(μL) | 20 | 20 |
試劑三(μL) | 20 | |
混勻,37℃水浴30min,微量石英比色皿/96孔板,蒸餾水調零,測定460nm吸光值。ΔA=A測定-A對照。 |
酶活性計算公式:
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
(1)按樣本蛋白濃度計算:
酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每毫克組織蛋白每分鐘催化產生1nmol H2O2所需的酶量為一個酶活力單位(U)。
DAO活性(nmol/min/mg prot)= ×V反總÷(V樣×Cpr)÷T= 18×A460÷Cpr
(2)按樣本質量計算:
酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每克組織每分鐘催化產生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
DAO活性(nmol/min/g 鮮重)= ×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T= 18×A460÷W
(3)按細胞數量計算:
酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每104個細胞每分鐘催化產生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
DAO活性(nmol/min/104cell)= ×V反總÷(V樣÷V樣總×細胞數量)÷T= 18×A460÷細胞數量
(4) 按液體體積計算
酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每毫升血清每分鐘催化產生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
DAO活性(nmol/min/mL)= ×V反總÷V樣÷T= 18×A460
ε:氧化型鄰聯茴香胺毫摩爾消光系數:7.5 L/mmol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應總體積,0.2mL;V樣:反應中樣本體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;T:反應時間,30min
b. 用96孔板測定的計算公式如下
(1)按樣本蛋白濃度計算:
酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每毫克組織蛋白每分鐘催化產生1nmol H2O2所需的酶量為一個酶活力單位(U)。
DAO活性(nmol/min/mg prot)= ×V反總÷(V樣×Cpr)÷T= 36×A460÷Cpr
(2)按樣本質量計算:
酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每克組織每分鐘催化產生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
DAO活性(nmol/min/g 鮮重)= ×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T= 36×A460÷W
(3)按細胞數量計算:
酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每104個細胞每分鐘催化產生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
DAO活性(nmol/min/104cell)= ×V反總÷(V樣÷V樣總×細胞數量)÷T= 36×A460÷細胞數量
(4) 按液體體積計算
酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每毫升血清每分鐘催化產生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。
DAO活性(nmol/min/mL)= ×V反總÷V樣÷T= 36×A460
ε:氧化型鄰聯茴香胺毫摩爾消光系數:7.5 L /mmol/cm;d:96孔板光徑,0.5cm;V反總:反應總體積,0.2mL;V樣:反應中樣本體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;T:反應時間,30min
注意事項:
1、如果OD值小于0.01,適當加大提取用樣本量;OD值大于0.8,粗酶液可適當稀釋,或者減少提取用樣本量。
2、樣品蛋白質含量需要另外測定。
上海牧榮生物科技有限公司
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