簡要描述:二氫黃酮醇還原酶(DFR)測試盒 二氫黃酮醇還原酶(Dihydro flavonol reductase,DFR)試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實驗室產(chǎn)品.為客戶全面解決實驗、生產(chǎn)、開發(fā)需求,提供方便、快捷的服務(wù)。
詳細(xì)介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 |
二氫黃酮醇還原酶(DFR)測試盒
注意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義
二氫黃酮醇還原酶是類黃酮合成途徑中的一個關(guān)鍵酶,在決定植物的花色、葉色、果色和其他經(jīng)濟(jì)器官的色澤及其營養(yǎng)品質(zhì)方面起著重要作用。
測定原理
二氫黃酮醇還原酶作用于二氫槲皮素產(chǎn)生兒茶素,可與香草醛縮合形成紅色化合物,在500nm處有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品
研缽、低溫離心機(jī)、震蕩儀、氮吹儀、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、水浴鍋、無水乙醇、乙酸乙酯。
試劑組成和配制
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體12mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體1.5mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加2mL蒸餾水溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑四:液體30mL×1瓶,4℃避光保存。
酶液提取
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。10000g ,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定操作表
分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長至500nm。
操作表
對照管 | 測定管 | |||
酶液(μL) | 40 | 40 | ||
試劑一(μL) | 140 | 120 | ||
試劑二(μL) | 20 | |||
試劑三(μL) | 20 | 20 | ||
混勻,30℃反應(yīng)30min | ||||
乙酸乙酯(μL) | 200 | 200 | ||
37℃震蕩10min,取上層溶液,N2吹干 | ||||
無水乙醇(μL) | 100 | 100 | ||
充分震蕩 | ||||
試劑四(μL) | 300 | 300 | ||
混勻,25℃靜置10min,于微量石英比色皿/96孔板中測定500nm處吸光值A(chǔ)。分別記為A對照管和A測定管,△A=A測定管-A對照管 |
酶活性計算公式
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y=0.0184x+0.0002,R2=0.999
(1)按照蛋白濃度計算
酶活性定義:在30℃,pH7.5條件下,每毫克蛋白每分鐘分解二氫槲皮素產(chǎn)生1mmol兒茶素所需的酶量為一個酶活力單位。
DFR活性(mmol/min/mg prot)=(△A-0.0002)÷0.0184×V反總÷(V樣×Cpr)÷T÷2
= 9.06×(△A-0.0002)÷Cpr
(2)按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義:在30℃,pH7.5條件下,每克組織每分鐘分解二氫槲皮素產(chǎn)生1mmol兒茶素所需的酶量為一個酶活力單位。
DFR活性(mmol/min/g 鮮重)= (△A-0.0002)÷0.0184×V反總÷(V樣×W÷V樣總)÷T÷2
= 9.06×(△A-0.0002)÷W
V反總:反應(yīng)總體積,1mL;V樣:反應(yīng)體系中樣本體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W,樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間,30min
b.用96孔板測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y=0.0092x+0.0002,R2=0.999
(1)按照蛋白濃度計算
酶活性定義:在30℃,pH7.5條件下,每毫克蛋白每分鐘分解二氫槲皮素產(chǎn)生1mmol兒茶素所需的酶量為一個酶活力單位。
DFR活性(mmol/min/mg prot)=(△A-0.0002)÷0.0092×V反總÷(V樣×Cpr)÷T÷2
= 9.06×(△A-0.0002)÷Cpr
(2)按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義:在30℃,pH7.5條件下,每克組織每分鐘分解二氫槲皮素產(chǎn)生1mmol兒茶素所需的酶量為一個酶活力單位。
DFR活性(mmol/min/g 鮮重)= (△A-0.0002)÷0.0092×V反總÷(V樣×W÷V樣總)÷T÷2
= 9.06×(△A-0.0002)÷W
V反總:反應(yīng)總體積,1mL;V樣:反應(yīng)體系中樣本體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W,樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間,30min
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