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乳酸脫氫酶(LDH)測試盒

簡要描述:乳酸脫氫酶(LDH)測試盒 乳酸脫氫酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品.為客戶全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開發(fā)需求,提供方便、快捷的服務(wù)。

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):代理商
  • 更新時(shí)間:2024-05-06
  • 訪  問  量:159

詳細(xì)介紹

品牌其他品牌供貨周期現(xiàn)貨
應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥

乳酸脫氫酶(LDH)測試盒

正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義:

LDH(EC 1.1.1.27)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是糖酵解途徑的末端酶,催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng),伴隨著NAD+/NADH之間互變。

測定原理:

LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

提取液:60mL×1瓶, 4℃保存;

試劑一:液體5 mL×1瓶, 4℃保存; 

試劑二:粉劑×1支,-20℃保存,用時(shí)加入10μL試劑五和1.3 mL蒸餾水充分溶解備用,用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;

試劑三:液體5 mL×1瓶,4℃保存; 

試劑四:液體20 mL×1瓶,4℃保存; 

試劑五:液體100μL×1支,4℃保存;

樣品測定的準(zhǔn)備:

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為1000~5000:1的比例(建議2000萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

測定步驟:

  1. 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm,蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測定(在EP管中加入下列試劑)

試劑名稱(μL)

測定管

對照管

樣本

10

10

試劑一

50

50

試劑二

10


蒸餾水


10

充分混勻,37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)準(zhǔn)確水浴15min

試劑三

50

50

充分混勻,37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)準(zhǔn)確水浴15min

試劑四

150

150

充分混勻,室溫靜置15min, 450 nm下測定吸光度,計(jì)算ΔA=A測定管-A對照管。每個(gè)測定管需要設(shè)一個(gè)對照管。

LDH活力單位的計(jì)算:

a.用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸曲線, y = 0.9108x+0.0037   (x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度,umol/mL;y為ΔA)。

2、血清(漿)LDH活力的計(jì)算

單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。

LDH(nmol/min/mL)=(ΔA-0.0037)÷0.9108÷T×103=73.2×ΔA

3、細(xì)胞、細(xì)菌和組織中LDH活力的計(jì)算

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。

LDH(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0037)÷0.9108×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =73.2×ΔA÷Cpr

需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。

(2) 按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。

LDH(nmol/min/g鮮重)=[(ΔA-0.0037)÷0.9108×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =73.2×ΔA÷W

(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。

LDH(nmol/min/104 cell)= [(ΔA-0.0037)÷0.9108×V1]÷(2000×V1÷V2)÷T×103 =0.037×ΔA

V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.01mL;V2:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,15 min;Cpr:蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;2000:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),2000萬;103:1umol/mL=103 nmol/mL。

b.使用96孔板測定的計(jì)算公式如下:

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸曲線, y = 0.4554x+0.0037   (x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度,umol/mL;y為ΔA)。

2、血清(漿)LDH活力的計(jì)算

單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。

LDH(nmol/min/mL)=(ΔA-0.0037)÷0.4554÷T×103=146.4×(ΔA-0.0037)

3、細(xì)胞、細(xì)菌和組織中LDH活力的計(jì)算

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。

LDH(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0037)÷0.4554×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =146.4×(ΔA-0.0037)÷Cpr

需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。

(2) 按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。

LDH(nmol/min/g鮮重)=[(ΔA-0.0037)÷0.4554×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =146.4×(ΔA-0.0037)÷W

(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。

LDH(nmol/min/104 cell)= [(ΔA-0.0037)÷0.4554×V1]÷(2000×V1÷V2)÷T×103 =0.073×(ΔA-0.0037)

V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.01mL;V2:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,15 min;Cpr:蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;2000:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),2000萬;103:1umol/mL=103 nmol/mL。

  1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為:0.1 umol/mL -2 umol/mL。

  2. ΔA線性范圍為:0.01 -1。


上海牧榮生物科技有限公司

  1. 國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

  2. 國外試劑的訂購??商峁W美實(shí)驗(yàn)室品牌的采購方案。

  3. 提供加急物流處理,進(jìn)口貨物,最快交期1-2周。

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  5. 公司代理眾多有名生命科學(xué)領(lǐng)域的研究試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,Click Chemistry tools,Nanoprobes,Ancell,NANOCS,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點(diǎn)合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

  6. 質(zhì)量保證,所有產(chǎn)品都提供售后服務(wù)。付款方式靈活。公司堅(jiān)持“一站式"服務(wù)模式,為客戶全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開發(fā)需求。公司整合國際與國內(nèi)資源,加強(qiáng)網(wǎng)絡(luò)建設(shè),提高公司內(nèi)部運(yùn)作效率,為客戶提供方便、快捷的服務(wù)。

  7. 公司突出創(chuàng)新思維,提高工作效能,減低運(yùn)作成本,為客戶提供優(yōu)惠的價(jià)格。

乳酸脫氫酶(LDH)測試盒


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