簡要描述:UDPG焦磷酸化酶(UPG)測試盒,尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphosphprylase,UGP)試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實驗室產(chǎn)品
詳細(xì)介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 |
UDPG焦磷酸化酶(UPG)測試盒,尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphosphprylase,UGP)試劑盒
注意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義
UDPG焦磷酸化酶是生物體糖原合成過程中的關(guān)鍵酶。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化,將1-磷酸葡萄糖與UTP分子合成為UDP-葡萄糖(UDPG)。
測定原理
UGP可逆催化反應(yīng)生成1磷酸葡萄糖,在磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下將NADP轉(zhuǎn)化為NADPH,340nm的吸光值增加速率反映了UGP活性。
自備實驗用品及儀器
天平、低溫離心機、研缽、紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板
試劑組成和配制
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體10mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1 瓶,-20℃保存。臨用前加2mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存。臨用前加2mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑四:粉劑×1瓶,-20℃保存。臨用前加2mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑五:液體2mL×1瓶,4℃保存。
酶液提取
組織:按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,10000g離心10min,取上清置冰上待測。
細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后4℃,10000g離心10min,取上清置冰上待測。
液體:直接檢測。
測定操作
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。
取微量石英比色皿/96孔板,依次加入100μL試劑一,20μL試劑二,20μL試劑三,20μL試劑四,20μL試劑五,20μL粗酶液,充分混勻,記錄340nm處30s的吸光值A(chǔ)1和330s的吸光值A(chǔ)2,△A=A2-A1
計算公式
a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
(1)按照樣本蛋白濃度計算
酶活單位定義:每毫克組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個酶活力單位。
UGP(nmol/min /mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
(2)按照樣本質(zhì)量計算
酶活單位定義:每克組織每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個酶活力單位。
UGP(nmol/min /g 鮮重)=ΔA÷(ε×d)×V反總÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.54×ΔA÷W
(3)按照細(xì)胞數(shù)量計算
酶活單位定義:每104個細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個酶活力單位。
UGP(nmol/min /104 cell)= ΔA÷(ε×d)×V反總÷(V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總) ÷T
=321.54×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量
(4)按照液體體積計算
酶活單位定義:每毫升液體每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個酶活力單位。
UGP(nmol/min /mL)=ΔA÷(ε×d)×V反總÷V樣÷T=321.54×ΔA
V反總:反應(yīng)體系總體積,0.2mL;ε:NADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g
b.使用96孔板測定的計算公式如下
(1)按照樣本蛋白濃度計算
酶活單位定義:每毫克組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個酶活力單位。
UGP(nmol/min /mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T=643.08×ΔA÷Cpr
(2)按照樣本質(zhì)量計算
酶活單位定義:每克組織每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個酶活力單位。
UGP(nmol/min /g 鮮重)=ΔA÷(ε×d)×V反總÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=643.08×ΔA÷W
(3)按照細(xì)胞數(shù)量計算
酶活單位定義:每104個細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個酶活力單位。
UGP(nmol/min /104 cell)= ΔA÷(ε×d)×V反總÷(V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總) ÷T
=643.08×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量
(4)按照液體體積計算
酶活單位定義:每毫升液體每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個酶活力單位。
UGP(nmol/min /mL)=ΔA÷(ε×d)×V反總÷V樣÷T=643.08×ΔA
V反總:反應(yīng)體系總體積,0.2mL;ε:NADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,0.5cm;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g
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UDPG焦磷酸化酶(UPG)測試盒,尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphosphprylase,UGP)試劑盒
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