簡要描述:N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-D-glucosidase, NAG)試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品
詳細(xì)介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 |
N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-D-glucosidase, NAG)試劑盒
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
NAG是溶酶體中的一種酸性水解酶,廣泛存在于各種組織、體液和細(xì)胞中,以前列腺和腎近曲小管細(xì)胞內(nèi)含量最高。NAG活性變化與機(jī)體某些病理狀態(tài)密切相關(guān)。
測定原理:
NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成對-硝基苯酚,后者在400nm有最大吸收峰,通過測定吸光值升高速率來計(jì)算NAG活性。
自備用品:
酶標(biāo)儀/可見分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水,充分溶解備用;用不完的試劑仍-20℃保存。
試劑二:液體4mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體13mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);15000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
3、血清(漿)樣品:直接檢測。
測定步驟:
酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至400nm,蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定(在EP管或96孔板中依次加入下列試劑):
試劑名稱(μL) | 測定管 | 對照管 |
試劑一 | 25 | |
蒸餾水 | 25 | |
試劑二 | 35 | 35 |
樣本 | 10 | 10 |
迅速混勻,放入37℃保溫30min
試劑三 | 130 | 130 |
充分混勻, 400nm處測定吸光值A(chǔ),計(jì)算ΔA=A測定-A對照。每個測定管需設(shè)一個對照管。
NAG活性計(jì)算:
a.用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.00585x +0.0083;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(nmol/mL),y為吸光值。
2、血清(漿)NAG活力的計(jì)算
單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
NAG活力(nmol /min/mL)= [(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V反總]÷V樣÷T =39.89×(ΔA-0.0083)
3、細(xì)胞、細(xì)菌和組織中NAG活力的計(jì)算
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
NAG活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=39.89×(ΔA-0.0083) ÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算:
單位的定義:每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
NAG活性(nmol/min/g鮮重)= [(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=39.89×(ΔA-0.0083)÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:
單位的定義:每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
NAG活性(nmol/min /104cell) =[(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.08×(ΔA-0.0083)
V反總:反應(yīng)體系總體積,0.07mL;V樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.01mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g; 500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500萬;T:反應(yīng)時間,30min。
b.用96孔板測定的計(jì)算公式如下
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.0039x +0.0083;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(nmol/mL),y為吸光值。
2、血清(漿)NAG活力的計(jì)算
單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
NAG活力(nmol /min/mL)= [(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V反總]÷V樣÷T =59.83×(ΔA-0.0083)
3、細(xì)胞、細(xì)菌和組織中NAG活力的計(jì)算
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
NAG活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=59.83×(ΔA-0.0083) ÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算:
單位的定義:每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
NAG活性(nmol/min/g鮮重)= [(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=59.83×(ΔA-0.0083)÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:
單位的定義:每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
NAG活性(nmol/min /104cell) =[(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.12×(ΔA-0.0083)
V反總:反應(yīng)體系總體積,0.07mL;V樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.01mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g; 500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500萬;T:反應(yīng)時間,30min。
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