陽離子脂質(zhì)(lipoplexes)和聚合物(polyplexes)是常用的非病毒基因遞送系統(tǒng)。 Tee 技術(shù)(觸發(fā)內(nèi)體逃逸)結(jié)合并利用了兩個實體的特性,以實現(xiàn)極其有效的核酸遞送到細胞中。事實上,新一代脂多胺含有親脂部分(例如脂質(zhì))和帶電多胺部分(例如陽離子聚合物)。這些部分協(xié)同作用,確保緊密的核酸壓縮和保護以及內(nèi)體膜非常有效的去穩(wěn)定,從而允許在胞質(zhì)溶膠中釋放大量核酸并攝取DNA核。特別關(guān)注可生物降解實體的合成。這樣,轉(zhuǎn)染試劑不會干擾細胞機制,每次實驗都能保持高細胞活力,并避免任何潛在的副作用。
轉(zhuǎn)染效率與高轉(zhuǎn)基因表達水平或高基因沉默以及最小化細胞毒性相結(jié)合取決于多個關(guān)鍵參數(shù)。這些因素包括細胞類型、質(zhì)粒 DNA 特征(大小、啟動子、報告基因)和純度、siRNA 序列和純度、細胞培養(yǎng)條件(含或不含血清的培養(yǎng)基、細胞數(shù)量、無污染……)、核酸和試劑的量、轉(zhuǎn)基因測定僅舉幾例。因此,需要根據(jù)待遞送的核酸(DNA、siRNA、mRNA、ODN、shRNA 等)和所使用的細胞類型專門設(shè)計轉(zhuǎn)染試劑,以達到最佳效率。
脂轉(zhuǎn)染法特別適用于永生化細胞。
Tee 技術(shù)的主要優(yōu)勢是:
納米顆粒中 DNA 的壓縮被細胞有效內(nèi)化
保護核酸免遭核酸酶降解
高效的膜去穩(wěn)定和 DNA 遞送
即使核酸含量低也能高效
生物降解性
該協(xié)議是一個非常簡單的過程:
1. 準(zhǔn)備 DNA 和試劑溶液。
2. 將它們混合在一起并孵育 20 分鐘。
3. 添加到您的單元格中。