Magnetofection™ 是一種簡單且高效的方法轉(zhuǎn)染方法可轉(zhuǎn)染原代細胞和難轉(zhuǎn)染細胞。
Magnetofection™ 的原理是將核酸、轉(zhuǎn)染試劑或病毒與特定的磁性納米粒子結(jié)合起來。然后將所得的分子復合物濃縮并運輸?shù)接蛇m當磁場支持的細胞中。通過這種方式,利用施加在基因載體上的磁力可以將所施加的全部載體劑量非??焖俚丶性诩毎?,從而使 100% 的細胞與有效的載體劑量接觸,并促進細胞攝取。
磁性納米顆粒由氧化鐵制成,可生物降解,并根據(jù)應用涂有特定的專有陽離子分子。它們與基因載體(DNA、siRNA、ODN、病毒等)的結(jié)合是通過鹽誘導的膠體聚集和靜電相互作用來實現(xiàn)的。然后,通過特定磁板產(chǎn)生的外部磁場的影響,磁性顆粒被濃縮到細胞上。遺傳物質(zhì)的細胞攝取是通過胞吞作用和胞飲作用這兩個自然生物過程來完成的。因此,與破壞細胞膜、產(chǎn)生孔洞或電擊細胞膜的其他物理轉(zhuǎn)染方法相比,膜結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)保持完整。然后,根據(jù)所使用的制劑,通過不同的機制將核酸釋放到細胞質(zhì)中。
首先是納米顆粒上包覆的陽離子聚合物引起的質(zhì)子海綿效應,促進內(nèi)體滲透膨脹、內(nèi)體膜破壞和細胞內(nèi) DNA 釋放。
其次是顆粒上包被的陽離子脂質(zhì)使內(nèi)體不穩(wěn)定,通過細胞負性脂質(zhì)的翻轉(zhuǎn)和電荷中和將核酸釋放到細胞中。
第三個是使用病毒時通常的病毒機制。
可生物降解的陽離子磁性納米粒子在推薦劑量甚至更高劑量下沒有毒性。基因載體/磁性納米顆粒復合物在 10-15 分鐘后內(nèi)化到細胞中,即比任何其他轉(zhuǎn)染方法快得多。 24、48 或 72 小時后,大多數(shù)顆粒位于細胞質(zhì)、液泡(細胞周圍結(jié)構(gòu)的膜)中,偶爾位于細胞核中。此外,磁性納米粒子不影響細胞功能。
Magnetofection™ 是適用于所有類型核酸(DNA、siRNA、dsRNA、shRNA、mRNA、ODN...)、非病毒轉(zhuǎn)染系統(tǒng)(轉(zhuǎn)染試劑)和病毒的通用技術(shù)。
該方案是一個非常簡單的程序:
1. 在無血清培養(yǎng)基或緩沖液中稀釋核酸或載體,并添加 Magnetofection™ 試劑。
2. 孵育 20-30 分鐘。
3. 將這些復合物直接添加到細胞中。
4.施加磁場(將培養(yǎng)板放在磁力板上)。
5. 孵育5-20分鐘,取出磁板并培養(yǎng)細胞直至測定。
Magnetofection™ 要求是磁板專為此應用而設計。磁性板是一次性購買且可重復使用,因此您不需要與電穿孔或基因槍等方法相反的昂貴設備?;旧?,所需的磁場是由特定的磁鐵產(chǎn)生的。三種磁性板可供選擇:超級磁性板、具有 96 個磁鐵的磁性板和巨型磁性板。他們的設計允許產(chǎn)生異質(zhì)磁場,磁化溶液中的納米顆粒,形成非常強的梯度以吸引納米顆粒并覆蓋板的所有表面。該板可用 70% 乙醇清洗并在培養(yǎng)箱或機器人中使用。