品牌 其他品牌 貨號 PP-305-425 供貨周期 現(xiàn)貨 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥
jenabioscience:Atto425 NT Labeling Kit 貨號:PP-305L-425Jena Bioscience由Max-Planck-Institute of Molecular Physiology(Dortmund)的一組科學(xué)家于1998年成立,利用超過25年的學(xué)術(shù)知識為100多個(gè)國家的研究和行業(yè)客戶開發(fā)創(chuàng)新試劑。
供一般實(shí)驗(yàn)室使用。
運(yùn)輸: 凝膠包裝運(yùn)輸
儲存條件: 儲存在-20°C 避免冷凍/解凍循環(huán),避光儲存
保質(zhì)期: 12個(gè)月
光譜特性: λ exc 436納米,λ 全身長的 484納米,ε 45.0毫摩爾 -1 厘米 -1 (三羥甲基氨基甲烷-鹽酸,pH 7.5)
描述: Atto425缺口翻譯標(biāo)記試劑盒包含缺口翻譯標(biāo)記所需的所有試劑(除了用于純化探針的模板和材料),提供了一種高效、易于實(shí)施和快速的標(biāo)記技術(shù)。 該試劑盒被推薦用于DNA的直接酶標(biāo)記。Atto425 NT標(biāo)記混合物包含經(jīng)過特別優(yōu)化的Atto425-dUTP,可通過DNA聚合酶I進(jìn)行缺口翻譯,從而整合到DNA中。熒光團(tuán)出色的穩(wěn)定性和量子產(chǎn)率,加上染料-dUTP復(fù)合物的高整合率,使其成為各種熒光應(yīng)用的理想選擇。 缺口翻譯標(biāo)記基于聚合酶I和脫氧核糖核酸酶I的反向活性。脫氧核糖核酸酶I能夠在低酶濃度下將隨機(jī)分布的缺口引入雙鏈DNA。聚合酶I的5’→3’核酸外切酶活性從缺口的3’側(cè)去除核苷酸,同時(shí)使用3’-OH末端作為引物合成部分新的互補(bǔ)鏈。在存在染料標(biāo)記的dUTP聚合酶的情況下,I摻入標(biāo)記的dUTP而不是dTTP。酶混合物中平衡良好的聚合酶/核酸酶活性確保了高度標(biāo)記的雙鏈DNA片段的產(chǎn)生。 所得DNA適用于FISH、微陣列基因表達(dá)譜和其他核酸雜交分析。 保護(hù)熒光標(biāo)記的dUTP免受光照射,并在弱光條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)程序。
內(nèi)容: 酶混合物(紅色瓶蓋) 儲存緩沖液中的2單位/微升聚合酶I和0.02單位/微升脫氧核糖核酸酶I
NT標(biāo)記緩沖液(綠色瓶蓋) 10倍濃度
Atto425 NT標(biāo)簽混合物(紫色瓶蓋) 0.5毫米dATP、0.5毫米dCTP、0.5毫米dGTP、0.25毫米dTTP、 0.25毫米Atto425-dUTP,pH 7.5
停止緩沖器(黃色蓋子) 0.5 M EDTA,pH 8.0
PCR級水(白色瓶蓋)
推薦的NT檢測: 樣品材料可以是超螺旋或線性化的質(zhì)粒DNA、粘?;駼AC DNA、完整或部分染色體或純化的PCR產(chǎn)物。 在無菌小瓶中制備以下反應(yīng)混合物。 20 μl缺口翻譯標(biāo)記分析
填充至20微升 PCR級水 白色帽子 2微升 10x NT標(biāo)記緩沖液 綠色帽子 2微升 Atto425 NT 標(biāo)簽混合 紫色帽子 1-1.5微克 模板dna - 2微升 酶混合物 紅色帽子
輕輕渦旋混合物以確保均勻,并短暫離心以收集試管底部的反應(yīng)混合物。 將試管置于15°c預(yù)冷的熱混合器中。建議孵育90分鐘,以產(chǎn)生大小在200和500 bp之間的DNA片段。 為了控制片段的長度,在瓊脂糖凝膠上加載2 μl分析物。運(yùn)行凝膠時(shí),將反應(yīng)管置于-20°C。 為了獲得更小的片段,添加額外的2 μl酶混合物,并在15℃下延長孵育時(shí)間 為最終終止反應(yīng),添加5 μl終止緩沖液(黃色瓶蓋)。進(jìn)行純化或儲存在-20°c下 探針的純化: 為了在反應(yīng)混合物用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)之前從反應(yīng)混合物中除去未摻入的核苷酸,建議采用以下程序之一: 1.硅膠膜吸附純化- PCR純化試劑盒。不,第201頁 Jena Bioscience PCR純化試劑盒提供了一種簡單有效的方法來純化大于100 bp的DNA片段。該制劑基于二氧化硅膜技術(shù),用于在高鹽中結(jié)合DNA,并在低鹽緩沖液中洗脫。請參考說明書。 2.異丙醇沉淀提純 向反應(yīng)混合物中加入1 μl糖原(2 mg/ml)、2 μl乙酸鈉(3 M)和14 μl異丙醇,并輕輕充分混合。室溫下孵育15分鐘,并在4℃下以最大速度旋轉(zhuǎn)30分鐘。棄去上清液,用70 %乙醇洗滌2次(以最大速度旋轉(zhuǎn)5分鐘)。 3.離心過濾裝置凈化 未摻入的核苷酸可以用離心過濾裝置通過離心去除。根據(jù)DNA片段的截止值選擇過濾器裝置,并遵循制造商的說明。
熒光團(tuán)的摻入率: DNA標(biāo)記的效率可以通過計(jì)算摻入的熒光團(tuán)與片段中堿基數(shù)量的比率(染料/堿基)來估計(jì)。 1.光密度的測量: 測量標(biāo)記的DNA片段在260 nm處的吸光度(A 260 )和激發(fā)最大值(λ exc )為染料(A 給…染色 ). 2.A的校正 260 閱讀: 為了獲得核酸的精確吸光度測量,必須校正260 nm處染料的貢獻(xiàn)。使用以下等式: A 基礎(chǔ) = A 260 -(答 給…染色 x CF 260) Atto425的校正系數(shù):CF 260 = 0.27 3.標(biāo)記率的計(jì)算: 染料與堿的比例由下式給出: 染料/堿= (A 給…染色 x ε 基礎(chǔ) )/ (A 基礎(chǔ) x ε 給…染色 ) 消光系數(shù): Atto425: ε 給…染色 = 45000厘米 -1 M-1 dsDNA: ε 基礎(chǔ) = 6600厘米 -1 M-1 ssDNA: ε 基礎(chǔ) = 8900厘米 -1 M-1 寡核苷酸:ε堿基= 10000cm -1 M-1 實(shí)施例:染料與堿基之比為0.05對應(yīng)于將10個(gè)dye-dUTP核苷酸分別摻入到含有200個(gè)核苷酸的DNA片段中,或者摻入到100 bp的PCR片段中。如果可以假設(shè)dATP、dCTP、dGTP和dTTP在DNA片段中的平均分布,50個(gè)現(xiàn)有dttp中的10個(gè)已經(jīng)被dye-dUTP取代,導(dǎo)致20 %的標(biāo)記率。
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上海牧榮生物科技有限公司
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公司突出創(chuàng)新思維,提高工作效能,減低運(yùn)作成本,為客戶提供優(yōu)惠的價(jià)格。
jenabioscience:Atto425 NT Labeling Kit 貨號:PP-305L-425