簡要描述:HiFiScript gDNA Removal cDNA Synthesis Kit:本產(chǎn)品是用于去除基因組DNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄的試劑盒。該試劑盒在 42℃, 2 分鐘即可除去基因組 DNA。
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HiFiScript gDNA Removal cDNA Synthesis Kit
本產(chǎn)品是用于去除基因組DNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄的試劑盒。該試劑盒在 42℃, 2 分鐘即可除去基因組 DNA。同時由于反轉(zhuǎn)錄試劑中含有抑制 gDNA Eraser 的組分,經(jīng)過 gDNA Eraser 處理后的樣品可以直接進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成 cDNA。本試劑盒配有新型高效反轉(zhuǎn)錄酶 HiFiScript,新穎突變位點(diǎn)大幅提 升酶的轉(zhuǎn)錄活性,cDNA ***鏈合成的效率和產(chǎn)量更高,可利用pg級的總 RNA 或 mRNA 合成 cDNA ***鏈。如逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 cDNA 用于下游熒光定 量檢測,可在 42℃,15 分鐘完成逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。本試劑盒適用于***鏈 cDNA 的合成和后續(xù)的 RT-PCR、RT-qPCR、以及全長 cDNA 文庫的構(gòu)建等。
產(chǎn)品特點(diǎn)1.快速去除基因組:含有去除基因組 DNA 的 gDNA Eraser,只需 2 分鐘即可除去基因組 DNA。2.快速逆轉(zhuǎn)錄:15 分鐘即可獲得熒光定量 PCR 模板 cDNA 第一鏈合成。3.靈敏度高:可利用 pg 級總 RNA 或 mRNA 模板合成 cDNA 第一鏈。4.高效的逆轉(zhuǎn)錄效率:新穎突變位點(diǎn)大幅提升酶活性能,獲得更高產(chǎn)量的cDNA。注意事項1.在操作過程中應(yīng)避免 Rnase 污染,防止 RNA 降解或?qū)嶒炛械慕徊嫖廴荆ㄗh操作人員帶口罩和一次性手套并經(jīng)常更換手套,使用專門的儀器和耗材。2.逆轉(zhuǎn)錄體系配制在冰上進(jìn)行操作,防止 RNA 發(fā)生降解。試劑盒的酶使用后盡快置于-20℃保存,并盡量避免反復(fù)凍融。3.反應(yīng)體系可倍比放大,10ul 反應(yīng)體系可最大使用 1ug 總 RNA。4.Primer Mix 由 Oligo(dT)和 Random primer 配制而成,也可根據(jù)實驗需要選用 Oligo-dT Primer 或 Gene Specific Primer。5.若起始 RNA 的量小于 50 ng,建議加入 RNA 酶抑制劑。本試劑盒并未提供,如需要可單獨(dú)向本公司訂購。6.對于二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜的 RNA 模板,建議在操作步驟之前,將模板 RNA 在65℃孵育 5 分鐘立刻置于冰上,短暫離心后進(jìn)行下一步操作。使用方法將模板 RNA 在冰上解凍;試劑盒組分在室溫解凍后立刻置于冰上。使用前將每種溶液渦旋振蕩混勻,并經(jīng)短暫離心后使用。
去除基因組 DNA 反應(yīng)1)根據(jù)以下表格在冰上配制反應(yīng)體系,總體積為 10ul。為了保證反應(yīng)液配制的準(zhǔn)確性,先按反應(yīng)數(shù)+2 的量配制預(yù)混體系,然后再分裝到每個反應(yīng)管中,最后加入 RNA 樣品。
注意:如果總RNA量大于1ug,請按比例擴(kuò)大反應(yīng)體系。若起始RNA的量小于50 ng,則建議加入RNA酶抑制劑。2)渦旋震蕩混勻,短暫離心,使管壁上的溶液收集到管底。3)42℃孵育2分鐘(室溫反應(yīng)時,可以延長到30分鐘)。4)反應(yīng)結(jié)束后,短暫離心,置于冰上冷卻。2. 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)1)根據(jù)以下表格在冰上配制反應(yīng)體系,反應(yīng)液配制請在冰上進(jìn)行。為了保證反應(yīng)液配置的準(zhǔn)確性,先按數(shù)+2 的量配制成預(yù)混溶液,然后再分裝 10ul到每個反應(yīng)管中,取配制的預(yù)混液 10ul 加入至已完成去基因組的步驟 1 反應(yīng)管中。
注意:Primer Mix 可根據(jù)實驗需要使用 Oligo-dT Primer 或 Gene SpecificPrimer,建議 20ul 反應(yīng)體系 Oligo-dT Primer 50pmol,或 Gene Specific Primer2 pmol。2)混勻,短暫離心,使管壁上的溶液收集到管底。3)cDNA 合成反應(yīng)條件:a. 若下游進(jìn)行熒光定量 PCR 檢測,42℃孵育 15 分鐘,85℃孵育 5 分鐘。b. 若下游進(jìn)行普通 PCR 檢測,42℃孵育 30-50 分鐘,85℃孵育 5 分鐘。注意:對于二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜或GC含量高的模板,可以提高逆轉(zhuǎn)錄溫度至50℃,增強(qiáng)逆轉(zhuǎn)錄效率。4)反應(yīng)結(jié)束后,短暫離心后置于冰上,再進(jìn)行后續(xù) PCR 或熒光定量 PCR,如果需要長時間保存,請置于-20℃。注意:進(jìn)行 Real-time PCR 反應(yīng)時,逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的加量應(yīng)不超過 PCR 反應(yīng)總體積的 1/10。
本產(chǎn)品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途
上海牧榮生物科技有限公司
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HiFiScript gDNA Removal cDNA Synthesis Kit
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