組織無(wú)機(jī)磷含量測(cè)試盒

微量法 100T/96S

注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

無(wú)機(jī)磷主要指磷酸根，參與生物體內(nèi)多種代謝，包括能量代謝、核酸代謝、蛋白質(zhì)磷酸化和脫磷酸化等等，此外促進(jìn)碳水化合物的合成、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)運(yùn)。

測(cè)定原理：

鉬藍(lán)與磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物質(zhì)，通過(guò)測(cè)定660nm光吸收，即可計(jì)算無(wú)機(jī)磷含量。

自備儀器和用品：

離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、和蒸餾水。

試劑組成和配置：

試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體5mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前配制，加入10 mL蒸餾水，充分溶解后加入試劑二（全部），混勻。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支。

無(wú)機(jī)磷提取：

按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。10000rpm，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定：

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到660 nm，蒸餾水調(diào)零。

2.打開(kāi)水浴鍋，調(diào)節(jié)溫度到40℃。

3. 空白管：取0.5mL EP管，依次加入100μL蒸餾水，100μL試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測(cè)定吸光度，記為A空白管。

4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取0.5mL EP管，依次加入10μL標(biāo)準(zhǔn)液，90μL蒸餾水，100μL試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測(cè)定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

5. 測(cè)定管：取0.5mL EP管，依次加入10μL上清液，90μL蒸餾水，100μL試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

組織無(wú)機(jī)磷含量計(jì)算：

1. 按照蛋白含量計(jì)算

無(wú)機(jī)磷含量(μmol/mg prot)= [C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×V總÷Cpr

=1×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)÷Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算

無(wú)機(jī)磷含量(μmol/g 鮮重 )= [C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×V總÷W

=1×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)÷W

C標(biāo)準(zhǔn)液：1mmol/L；V總：上清液總體積，1mL=0.001 L；W：樣品質(zhì)量，g。

注意事項(xiàng)：

1. 試劑三需臨用前配制，并且當(dāng)天使用完畢。

2. 40min內(nèi)完成比色。

3. *低檢出限為10μmol/L。

上海牧榮生物科技有限公司

1. 國(guó)內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

2. 國(guó)外試劑的訂購(gòu)。可提供歐美實(shí)驗(yàn)室品牌的采購(gòu)方案。

3. 提供加急物流處理，進(jìn)口貨物，最快交期1-2周。

4. 進(jìn)出口貨物代理服務(wù)。

5. 公司代理眾多有名生命科學(xué)領(lǐng)域的研究試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點(diǎn)合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質(zhì)量保證，所有產(chǎn)品都提供售后服務(wù)。付款方式靈活。公司堅(jiān)持“一站式"服務(wù)模式，為客戶全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開(kāi)發(fā)需求。公司整合國(guó)際與國(guó)內(nèi)資源，加強(qiáng)網(wǎng)絡(luò)建設(shè)，提高公司內(nèi)部運(yùn)作效率，為客戶提供方便、快捷的服務(wù)。

7. 公司突出創(chuàng)新思維，提高工作效能，減低運(yùn)作成本，為客戶提供優(yōu)惠的價(jià)格。

組織無(wú)機(jī)磷含量測(cè)試盒