簡要描述:中性木聚糖酶測試盒(比色法)/中性半纖維素酶測試盒(比色法) 中性木聚糖酶(Neutral Xylanase,NEX)測定試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實驗室產(chǎn)品.為客戶全面解決實驗、生產(chǎn)、開發(fā)需求,提供方便、快捷的服務。
詳細介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 |
中性木聚糖酶測試盒(比色法)/中性半纖維素酶測試盒(比色法)
測定意義:
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生,能催化水解木聚糖,也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶,可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細胞壁以及β-葡聚糖,降低釀造中物料的粘度,促進有效物質(zhì)的釋放,以及降低飼料中的非淀粉多糖,促進營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用,因而廣泛的應用于釀造和飼料工業(yè)中,NEX一般分離自最適生長pH為6-8的微生物。
測定原理:
NEX在中性環(huán)境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖,在沸水浴條件下進一步與3,5-二硝基水楊中發(fā)生顯色反應,在540nm處有特征吸收峰,反應液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比,通過測定反應液在540nm吸光值增加速率,可計算NEX活力。
自備實驗用品及儀器:
天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋,可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制:
緩沖液:液體65mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。(若出現(xiàn)白色絮狀或顆粒狀沉淀,可60℃加熱溶解后使用)。
試劑二:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。
粗酶提?。?/p>
發(fā)酵液:發(fā)酵液于8000g,4℃,離心15min,取上清,作為待測樣品。
酶干粉:稱約0.1mg,加1mL緩沖液溶解待測。
組織樣本:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL緩沖液)進行冰浴勻漿,然后8000g,4℃,離心10min,取上清待測。
測定操作表:
分光光度計/酶標儀預熱30min,調(diào)節(jié)波長至540nm。
操作表
對照管 | 測定管 | |
樣品(μL) | 60 | 60 |
緩沖液(μL) | 90 | 90 |
試劑一(μL) | 60 | |
試劑二(μL) | 90 | |
混勻,蓋緊瓶蓋,50℃水浴,反應30min,立即沸水浴20min滅活。(注意不要讓蓋子爆開,以免進水,改變了反應體系) | ||
試劑一(μL) | 60 | |
試劑二(μL) | 90 | |
混勻,沸水浴顯色5min,取200µL于微量石英比色皿/96孔板中540nm處測定吸光值A,計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設一個對照管。 |
NEX計算公式:
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線:y = 1.6904x + 0.0058,R2 = 0.9989
1. 按液體體積活力計算:
酶活定義:50℃,pH6.0條件下,每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX活力(nmol/min/mL)= (ΔA-0.0058)÷1.6904÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106
= 657× (ΔA-0.0058)
2. 按蛋白濃度計算:
酶活定義:50℃,pH6.0條件下,每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX活力(nmol/min/mg prot)= (ΔA -0.0058)÷1.6904÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷Cpr
= 657×(ΔA -0.0058 ) ÷Cpr
3. 按鮮重計算:
酶活定義:50℃,pH6.0條件下,每克樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX活力(nmol/min/g鮮重)= (ΔA -0.0058)÷1.6904÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷W
= 657×(ΔA -0.0058 ) ÷W
150:木糖的分子量;T:反應時間,30min;稀釋倍數(shù)=V反總÷V樣=300µL÷60µL=5;
106:轉(zhuǎn)化因子,即1mg/mL=106ng/mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線:y = 0.8452x + 0.0058,R2 = 0.9989
1. 按液體體積活力計算:
酶活定義:50℃,pH6.0條件下,每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX活力(nmol/min/mL)= (ΔA-0.0058)÷0.8452÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106
= 1315× (ΔA-0.0058)
2. 按蛋白濃度計算:
酶活定義:50℃,pH6.0條件下,每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX活力(nmol/min/mg prot)= (ΔA -0.0058)÷0.8452÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷Cpr
= 1315×(ΔA -0.0058 ) ÷Cpr
3. 按鮮重計算:
酶活定義:50℃,pH6.0條件下,每克樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX活力(nmol/min/g鮮重)= (ΔA -0.0058)÷0.8452÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷W
= 1315×(ΔA -0.0058 ) ÷W
150:木糖的分子量;T:反應時間,30min;稀釋倍數(shù)=V反總÷V樣=300µL÷60µL=5;
106:轉(zhuǎn)化因子,即1mg/mL=106ng/mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g。
注意事項:
1. 吸光度變化應該控制在0.01~0.8之間,否則加大樣品量或稀釋樣品,注意計算公式中參與計算的稀釋倍數(shù)要相應改變;也可以延長或者縮短反應時間。
2. 試劑盒2-8℃保存,保質(zhì)期3個月,建議盡快使用。
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中性木聚糖酶測試盒(比色法)/中性半纖維素酶測試盒(比色法)
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