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丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒

簡要描述:丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實驗室產(chǎn)品.為客戶全面解決實驗、生產(chǎn)、開發(fā)需求,提供方便、快捷的服務(wù)。

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):代理商
  • 更新時間:2024-05-06
  • 訪  問  量:174

詳細介紹

品牌其他品牌供貨周期現(xiàn)貨
應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥

丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒

注意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義:

PDC主要存在于酵母中,是乙醇發(fā)酵的關(guān)鍵酶之一,催化丙酮酸脫羧生成乙醛。

測定原理:

PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛,添加乙醇脫氫酶(ADH)來進一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+;NADH在340 nm有吸收峰,而NAD+沒有;通過測定340 nm光吸收下降速率,來計算PDC活性。

自備儀器和用品:

研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。

試劑組成和配制:

試劑一:液體100mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體18mL×1瓶,4℃保存。

試劑三:液體2.5mL×1瓶,4℃保存。

試劑四:粉劑×1支,﹣20℃保存。

試劑五:液體30μL×1瓶,﹣20℃保存。

混合試劑:臨用前配制,將試劑四和試劑五轉(zhuǎn)移至試劑三中充分溶解待用,用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

試劑六:液體2mL×1管,4℃保存。

粗酶液提?。?/p>

1、細菌或細胞處理:收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每200萬細菌或細胞加入400μL提取液,超聲波破碎細菌或細胞(功率200W,工作3s,間歇10s,工作35次),16000g 4℃離心20min,取上清,置冰上待測。

2、組織處理:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿,16000g 4℃離心20min,取上清,置冰上待測。

3、血清(漿)樣品:直接檢測。

PDC測定操作:

1. 分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長到340 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二置于25℃水浴中預(yù)熱30min。

3. 空白管:依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL蒸餾水、20μL混合試劑、140μL試劑二和20μL試劑六,迅速混勻后于340nm比色,記錄15s和75s的吸光值,分別記為A1和A2。

4. 測定管:依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、20μL混合試劑、140μL試劑二和20μL試劑六,迅速混勻后于340nm比色,記錄15s和75s的吸光值,分別記為A3和A4。

注意:空白管只需測定一次。

PDC活性計算:

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

(1)按照蛋白濃度計算

活性單位定義:25℃中,每毫克蛋白每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個酶活單位。

PDC (nmol/min/mg prot) =÷(Cpr×V樣) ÷T

=1608×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷Cpr

(2)按照樣本質(zhì)量計算

活性單位定義:25℃中,每克組織每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個酶活單位。

PDC (nmol/min /g 鮮重) =÷(W×V樣÷V樣總) ÷T

=1608×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷W

(3)按細胞數(shù)量計算

活性單位定義:25℃中,每104個細胞每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個酶活單位。

PDC (nmol/min/104cell) =÷(細胞數(shù)量×V樣÷V樣總) ÷T

=1608×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷細胞數(shù)量

(4)按血清(漿)體積計算

活性單位定義:25℃中,每毫升血清(漿)每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個酶活單位。PDC (nmol/min /mL) =÷V樣÷T

=1608×[(A3-A4)-(A1-A2)]

ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V總:反應(yīng)體系總體積,0.2mL=2×10-4 L,V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,0.02mL;V樣總:提取液體積,1 mL;Cpr:蛋白濃度(mg/mL),需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量試劑盒;W :樣品質(zhì)量; T:反應(yīng)時間,1 min。

b.使用96孔板測定的計算公式如下

(1)按照蛋白濃度計算

活性單位定義:25℃中,每毫克蛋白每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個酶活單位。

PDC (nmol/min/mg prot) =÷(Cpr×V樣) ÷T

=3215×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷Cpr

(2)按照樣本質(zhì)量計算

活性單位定義:25℃中,每克組織每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個酶活單位。

PDC (nmol/min /g 鮮重) =÷(W×V樣÷V樣總) ÷T

=3215×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷W

(3)按細胞數(shù)量計算

活性單位定義:25℃中,每104個細胞每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個酶活單位。

PDC (nmol/min/104cell) =÷(細胞數(shù)量×V樣÷V樣總) ÷T

=3215×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷細胞數(shù)量

(4)按血清(漿)體積計算

活性單位定義:25℃中,每毫升血清(漿)每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個酶活單位。PDC (nmol/min /mL) =÷V樣÷T

=3215×[(A3-A4)-(A1-A2)]

ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:96孔板光徑,0.5 cm;V總:反應(yīng)體系總體積,0.2mL=2×10-4 L,V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,0.02mL;V樣總:提取液體積,1 mL;Cpr:蛋白濃度(mg/mL),需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量試劑盒;W :樣品質(zhì)量; T:反應(yīng)時間,1 min。



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  6. 質(zhì)量保證,所有產(chǎn)品都提供售后服務(wù)。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務(wù)模式,為客戶全面解決實驗、生產(chǎn)、開發(fā)需求。公司整合國際與國內(nèi)資源,加強網(wǎng)絡(luò)建設(shè),提高公司內(nèi)部運作效率,為客戶提供方便、快捷的服務(wù)。

  7. 公司突出創(chuàng)新思維,提高工作效能,減低運作成本,為客戶提供優(yōu)惠的價格。

丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒







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