簡(jiǎn)要描述:β葡萄糖醛酸苷酶(βGD)測(cè)試盒: 上海牧榮生物科技有限公司專(zhuān)業(yè)實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品。一站式"服務(wù)模式,為客戶全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開(kāi)發(fā)需求。
詳細(xì)介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 |
β葡萄糖醛酸苷酶(βGD)測(cè)試盒
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義
β-GD廣泛存在于動(dòng)物組織中,是一種參與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程的基質(zhì)降解酶,具有水解固醇葡萄糖醛酸和酸性粘多糖等生理功能。該酶在肝細(xì)胞中含量較高。此外在胃癌組織中含量豐富,測(cè)定胃液β-GD活性對(duì)于研究胃癌具有重要的意義。
測(cè)定原理
β-GD催化苯酚 β-D-葡萄糖醛酸產(chǎn)生游離的酚酞,通過(guò)測(cè)定苯酚含量反應(yīng)該酶活性高低。
需自備的儀器和用品
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體2mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入2mL蒸餾水,充分溶解待用;用不完的試劑仍-20℃保存;
試劑三:液體15mL×1瓶,4℃保存;
試劑四:1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液10mL,4℃保存;
樣品測(cè)定的前處理
按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至540nm,蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測(cè)定
試劑名稱(chēng)(μL) | 加樣孔 | ||
測(cè)定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 | |
試劑一 | 20 | 20 | 20 |
試劑二 | 20 | 20 | 20 |
樣本 | 10 | ||
1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液 | 10 | ||
蒸餾水 | 10 |
混勻后,37℃反應(yīng)30min
試劑三 | 150 | 150 | 150 |
混勻, 540nm下測(cè)定各管吸光值
注意:標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測(cè)一次。
β-GD活性計(jì)算
(1)按樣本鮮重計(jì)算:
單位定義:每小時(shí)每g鮮重樣品中催化產(chǎn)生 1μmol酚酞的量為一個(gè)活力單位。
β-GD(μmol/h/g 鮮重)= (C標(biāo)準(zhǔn)管×V1)×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=2×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷W
(2)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位定義:每小時(shí)每mg組織蛋白催化產(chǎn)生 1μmol酚酞的量為一個(gè)活力單位。
β-GD(μmol/h/mg prot)= (C標(biāo)準(zhǔn)管×V1)×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷(V1×Cpr)÷T=2×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷Cpr
C標(biāo)準(zhǔn)管:標(biāo)準(zhǔn)管濃度, 1μmol/mL;V1:加入樣本體積:0.01mL;V2:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時(shí)間,0.5h;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g。
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