Cytion 為細(xì)胞系培養(yǎng)提供全面的指南,強(qiáng)調(diào)無菌和無菌技術(shù)的重要性。我們的方案可確保在一系列細(xì)胞類型和應(yīng)用中成功進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。
設(shè)計(jì)組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室需要周密的規(guī)劃,以確保在安全高效的環(huán)境中生產(chǎn)高質(zhì)量的材料。最佳設(shè)施包括用于檢疫和處理未受污染材料的不同區(qū)域,每個(gè)區(qū)域都有專用的培養(yǎng)箱。當(dāng)空間不允許按區(qū)域分開時(shí),建議在時(shí)間上分開處理不同的材料。嚴(yán)格的清潔方案和至少遵守 2 類密封水平對(duì)于最大限度地降低污染風(fēng)險(xiǎn)和維持受控的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境至關(guān)重要。
引擎蓋實(shí)踐:通過正確定位引擎蓋窗扇并避免雜亂來保持層流氣流。
滅菌:移液器吸頭、玻璃移液器等高壓滅菌工具,并使用70%乙醇進(jìn)行表面消毒。
培養(yǎng)基選擇:查閱我們?cè)敿?xì)的培養(yǎng)基圖表,將您的細(xì)胞系與適當(dāng)?shù)?DMEM 或 RPMI 培養(yǎng)基相匹配,并輔以胎牛血清 (FBS) 和谷氨酰胺等添加劑。
補(bǔ)充劑的無菌性:所有培養(yǎng)基和補(bǔ)充劑必須無菌,必要時(shí)采用過濾滅菌。
個(gè)人防護(hù)裝備:在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室中,最大限度地減少傷害依賴于嚴(yán)格遵守個(gè)人防護(hù)裝備,例如符合 EN374-3 標(biāo)準(zhǔn)的手套。
消毒:最大限度地減少傷害還取決于正確使用次氯酸鈉或乙醇等消毒劑。為了實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生的全面安全性和有效性,下表詳細(xì)介紹了其他消毒劑及其具體使用案例:
消毒劑 | 有效對(duì)抗 | 專注 | 局限性 | 防范措施 |
次氯酸鈉 | 廣譜,包括病毒 | 表面 1000 ppm,移液器 2500 ppm,廢物/溢出物 10,000 ppm | 對(duì)金屬有腐蝕性,被有機(jī)物鈍化 | 應(yīng)每日新鮮制作,不可用于金屬表面 |
乙醇 | 細(xì)菌、大多數(shù)病毒 | 70% | 對(duì)無包膜病毒無效 | 在通風(fēng)良好的地方使用,避免皮膚長時(shí)間接觸 |
異丙醇 | 細(xì)菌 | 60-70% | 對(duì)病毒無效 | 在通風(fēng)良好的地方使用,避免皮膚長時(shí)間接觸 |
甲醛 | 廣譜,用于熏蒸 | 變化(以汽化形式用于熏蒸) | 有刺激性、致敏性、需要通風(fēng) | 避免暴露,熏蒸前去除次氯酸鹽 |
4. 培養(yǎng)環(huán)境設(shè)置
用于貼壁細(xì)胞系的燒瓶:經(jīng)過組織培養(yǎng)處理的燒瓶通常足以容納大多數(shù)細(xì)胞系。對(duì)于需要額外支持的某些細(xì)胞類型,可以對(duì)燒瓶進(jìn)行預(yù)處理或用明膠或纖連蛋白等底物包被。這些涂層可以顯著改善細(xì)胞附著和增殖。詳細(xì)的制備和包衣方案可在相應(yīng)的產(chǎn)品信息表中找到。
用于懸浮細(xì)胞系的燒瓶:使用專為非貼壁細(xì)胞設(shè)計(jì)的燒瓶,可使其自由移動(dòng)和充分的氣體交換。這些燒瓶不需要促進(jìn)細(xì)胞附著的表面處理。
維持細(xì)胞培養(yǎng)的健康是細(xì)胞培養(yǎng)工作的一個(gè)重要方面。持續(xù)監(jiān)測對(duì)于確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的完整性和可重復(fù)性至關(guān)重要。以下是監(jiān)測細(xì)胞健康狀況的詳細(xì)做法:
顯微鏡評(píng)估:每天使用顯微鏡檢查細(xì)胞,評(píng)估細(xì)胞健康的關(guān)鍵指標(biāo),包括一致的細(xì)胞附著、特征形態(tài)和預(yù)期的生長模式。尋找細(xì)胞大小和形狀的均勻性、是否存在不同的細(xì)胞核以及是否缺乏可能表明細(xì)胞死亡的顆粒度。
生長率監(jiān)測:跟蹤增殖率,確保其與細(xì)胞系的預(yù)期倍增時(shí)間一致。生長速率的突然變化可能表明細(xì)胞健康或培養(yǎng)條件存在潛在問題。
培養(yǎng)基評(píng)估:檢查培養(yǎng)基的顏色,它可以指示 pH 值的變化。泛黃的培養(yǎng)基表明酸度增加,通常是細(xì)胞代謝或細(xì)菌污染的副產(chǎn)品,而紫色或粉紅色調(diào)則表明更堿性的環(huán)境。
污染指標(biāo):警惕污染跡象,例如培養(yǎng)基渾濁、意外的 pH 變化或微生物菌落的存在。污染物可以是細(xì)菌、真菌或病毒,每種類型都有不同的視覺線索,例如細(xì)菌膜或真菌菌絲。
形態(tài)異常:如果細(xì)胞表現(xiàn)出與正常生長或分化無關(guān)的持續(xù)形態(tài)異常變化,則可能需要丟棄培養(yǎng)物。這包括廣泛的細(xì)胞變圓、脫離或細(xì)胞碎片的存在。
不可逆應(yīng)激跡象:尋找不可逆應(yīng)激或毒性的跡象,例如空泡形成、膜起泡或凋亡小體。這些通常是細(xì)胞死亡的前兆,并可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
生長條件退化:如果培養(yǎng)物已達(dá)到匯合或過度生長,導(dǎo)致營養(yǎng)耗盡和廢物積累,則應(yīng)將培養(yǎng)物進(jìn)行傳代培養(yǎng)或丟棄,以避免對(duì)細(xì)胞健康產(chǎn)生負(fù)面影響。
傳代培養(yǎng)或分裂細(xì)胞是細(xì)胞培養(yǎng)的常規(guī)部分,涉及將細(xì)胞培養(yǎng)物的一部分轉(zhuǎn)移到新鮮的生長培養(yǎng)基中以繁殖培養(yǎng)物。仔細(xì)的規(guī)劃和執(zhí)行對(duì)于此過程的成功至關(guān)重要。以下是一些有效傳代的增強(qiáng)策略:
計(jì)劃分割
最佳分流比:根據(jù)細(xì)胞系特征、生長速率和培養(yǎng)物的預(yù)期用途確定理想分流比。對(duì)于快速生長的細(xì)胞,這可能涉及 1:2 的分割;對(duì)于生長較慢的細(xì)胞系,可能需要 1:10 的分割。
供應(yīng)商規(guī)格:請(qǐng)參閱供應(yīng)商的產(chǎn)品表,了解針對(duì)每個(gè)細(xì)胞系的具體建議,其中通常包括詳細(xì)的傳代培養(yǎng)方案和細(xì)胞所需的條件。
培養(yǎng)的連續(xù)性:維護(hù)主細(xì)胞庫并使用一致的傳代培養(yǎng)程序,以確保細(xì)胞系的壽命和遺傳穩(wěn)定性。
及時(shí)補(bǔ)充營養(yǎng):應(yīng)在細(xì)胞耗盡必需營養(yǎng)之前更換培養(yǎng)基,這對(duì)于細(xì)胞的生長和代謝功能至關(guān)重要。
pH 值和毒素控制:定期改變可防止代謝副產(chǎn)物的積累并維持對(duì)細(xì)胞健康至關(guān)重要的生理 pH 值。
傳代限制:保留細(xì)胞傳代的詳細(xì)日志。頻繁傳代會(huì)導(dǎo)致遺傳漂變,從而改變細(xì)胞表型和行為。通過限制傳代次數(shù),可以保持細(xì)胞系的遺傳穩(wěn)定性和完整性。
傳代數(shù)記錄:每次細(xì)胞傳代培養(yǎng)時(shí),記錄傳代數(shù)。該信息對(duì)于跟蹤細(xì)胞系歷史和識(shí)別細(xì)胞行為中潛在的傳代相關(guān)變化至關(guān)重要。
驗(yàn)證記錄:定期驗(yàn)證細(xì)胞系身份(例如,通過短串聯(lián)重復(fù)(STR)分析)并在記錄中對(duì)此進(jìn)行注釋,以確保在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中使用正確的細(xì)胞系。
突變監(jiān)測:如果可能,監(jiān)測可能表明遺傳漂變或細(xì)胞系污染的關(guān)鍵遺傳或表型變化,并保存這些記錄以供參考。