Duolink® PLA試劑
有關(guān)具體的產(chǎn)品建議,請(qǐng)參閱Duolink® PLA產(chǎn)品選擇指南。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō),要運(yùn)行用于熒光檢測(cè)的Duolink® PLP實(shí)驗(yàn),需要以下Duolink® PLA產(chǎn)品:
一、Duolink® PLA探針(一種PLUS和一種來(lái)自不同物種的MINUS,與您的一抗宿主物種相匹配)。每個(gè)試劑盒包括:
1.PLA探針(5x)— PLUS和/或MINUS,取決于產(chǎn)品;
2.封閉溶液 — 用于在孵育抗體前封閉樣品;
3.抗體稀釋劑 — 用于稀釋PLA探針,而且如果需要,用于稀釋一抗。
注意:將試劑盒的所有組分存放在4°C溫度下。
注意:如果需要,可用Duolink® PLA試劑盒生成定制的PLA探針。
二、Duolink®熒光檢測(cè)試劑(可選擇綠色、橙色、紅色等)
每個(gè)試劑盒包括:
1.連接原液(5x) – 稀釋以制備1x連接緩沖液
2.連接酶 (1 U/μL) – 添加以制備連接溶液
3.擴(kuò)增原液 (5x) – 稀釋以制備1x擴(kuò)增緩沖液
4.聚合酶 (10 U/μL) - 添加以制備擴(kuò)增溶液
注意:將所有組分存放在-20°C溫度下。
三、熒光用洗滌緩沖液。
四、含DAPI的Duolin封固劑用于載玻片,儲(chǔ)存在2-8°C)或者細(xì)胞核染色劑和抗淬滅劑(用于微孔板,儲(chǔ)存在-20°C)
其他材料!
1.檢測(cè)目標(biāo)蛋白質(zhì)的一抗。當(dāng)與Duolink® PLA探針一起使用時(shí),必須在小鼠、兔子或山羊中飼養(yǎng)。
2.高純度純水(無(wú)菌過(guò)濾,Milli-Q®或類(lèi)似水質(zhì))
3.載玻片上的樣品(細(xì)胞或組織),已經(jīng)過(guò)固定、恢復(fù)和透化方面的預(yù)處理。關(guān)于下列主題的相關(guān)建議和詳細(xì)信息,請(qǐng)參閱如何優(yōu)化Duolink®鄰近連接測(cè)定:
1.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和對(duì)照
2.選擇一抗和優(yōu)化
3.樣品處理
設(shè)備
1.熒光顯微鏡,帶有適當(dāng)?shù)臑V光片、照相機(jī)和圖像采集軟件
2.37°C培養(yǎng)箱
3.水平搖床
4.加熱濕度箱或微孔板傳熱座
5.疏水筆,用于給反應(yīng)區(qū)域劃界
6.冰塊(用于酶)
7.染色罐
8.鑷子
9.移液器和吸頭(1 μl至1000 μl)
10.與熒光顯微鏡兼容的蓋玻片
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