T細(xì)胞ELISPOT測(cè)定

T細(xì)胞ELISPOT測(cè)定的預(yù)期用途

ELISPOT檢測(cè)是需要監(jiān)測(cè)的靈敏的檢測(cè)方法之一 離體 單細(xì)胞水平的細(xì)胞免疫反應(yīng)。該測(cè)定可以準(zhǔn)確檢測(cè)T細(xì)胞響應(yīng)抗原釋放的分泌蛋白，例如細(xì)胞因子。測(cè)試中使用的細(xì)胞懸浮液可以來自血液（PBMC），淋巴，脾臟，骨髓或CNS組織。

經(jīng)典的 T 細(xì)胞監(jiān)測(cè)試驗(yàn)（例如混合淋巴細(xì)胞反應(yīng) [MLR] 和細(xì)胞毒性 T 淋巴細(xì)胞 [CTL] 試驗(yàn)）測(cè)量 CD4 +或 CD8 +  T 細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。 MLR 和 CTL 檢測(cè)都有其缺點(diǎn)，包括使用放射性、低通量篩選、低溫保存標(biāo)本的靈敏度降低和技術(shù)負(fù)擔(dān)。也可以使用 RT-PCR 分析來測(cè)量 T 細(xì)胞反應(yīng)。然而，該測(cè)定檢測(cè)的是 mRNA 而不是分泌的蛋白質(zhì)。

ELISPOT 檢測(cè)沒有這些缺點(diǎn)，已證明比 ELISA 或細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色更靈敏。1-3 高靈敏度是由于板結(jié)合抗體在細(xì)胞釋放的分泌蛋白在細(xì)胞培養(yǎng)基中稀釋、與細(xì)胞表面受體相互作用或被蛋白酶降解之前直接捕獲細(xì)胞釋放的分泌蛋白。這一特性允許檢測(cè)極低頻率的細(xì)胞因子分泌細(xì)胞 (1/100,000)，并且還提供了高通量篩選的可能性。

應(yīng)用

• ELISPOT 檢測(cè)已被證明是一種靈敏的系統(tǒng)，可用于監(jiān)測(cè)人類個(gè)體或動(dòng)物的疾病進(jìn)展。多項(xiàng)研究表明，身體不同部位產(chǎn)生細(xì)胞因子的細(xì)胞頻率的變化充分反映了免疫功能的變化。4個(gè)

• ELISPOT 檢測(cè)可能有助于了解新病毒引起疾病的情況下疾病的發(fā)展，以及早期疫苗開發(fā)研究，

• ELISPOT 測(cè)定可用于分析 T 細(xì)胞反應(yīng)以預(yù)測(cè)同種異體移植排斥反應(yīng)。7

• ELISPOT測(cè)定可用于確定接種疫苗的非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物PBMC中抗原特異性T細(xì)胞反應(yīng)的頻率8,9 和免疫大鼠的脾臟細(xì)胞10 和老鼠11.

• ELISPOT測(cè)定可能有助于更好地了解病原體如何逃避保護(hù)性免疫。12

• ELISPOT測(cè)定已用于旨在誘導(dǎo)腫瘤特異性T細(xì)胞的疫苗接種試驗(yàn)過程中。13,14

T細(xì)胞ELISPOT程序的簡(jiǎn)要說明

將細(xì)胞在涂有高親和力單克隆抗體的ELISPOT板的孔中孵育特定時(shí)間，孵育期間產(chǎn)生的細(xì)胞因子與該抗體結(jié)合。隨后，細(xì)胞被洗掉。用生物素化的抗細(xì)胞因子檢測(cè)抗體和酶標(biāo)記的鏈霉親和素的組合來檢測(cè)包被抗體捕獲細(xì)胞因子的區(qū)域。測(cè)定的最后一步是添加底物，產(chǎn)生一個(gè)彩色區(qū)域（“斑點(diǎn)"），揭示細(xì)胞因子分泌的部位。
T細(xì)胞ELISPOT程序的不同步驟在 T細(xì)胞ELISPOT檢測(cè)流程圖.

這是人類PBMC中T細(xì)胞產(chǎn)生的IFN-γ和IL-2特異性斑點(diǎn)的一個(gè)例子。
該人肌內(nèi)注射了 病毒 mRNA 疫苗（加強(qiáng)疫苗接種）。用SARS-CoV-2肽庫(kù)刺激疫苗接種前后的PBMC，并在ELISPOT平板上孵育24小時(shí)（2x105 細(xì)胞/孔）

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