很多時候,進行細胞轉染的研究人員必須進行謹慎的平衡。實現(xiàn)足夠高的轉染水平以提供可靠的結果,同時又不在此過程中殺死太多細胞,是一項持續(xù)的斗爭。對于從事干細胞研究的科學家來說,這些問題更具挑戰(zhàn)性,因為它們的轉染率歷來較低(通常低于5%)。
許多科學家現(xiàn)在正在尋求利用干細胞進行基于CRISPR的基因編輯,以在細胞水平上對疾病產生新的理解。有一種高效可靠的方法來轉染干細胞,以實現(xiàn)基因組編輯的新發(fā)現(xiàn),這一點從未如此重要。現(xiàn)在非常需要針對CRISPR應用優(yōu)化干細胞轉染方案。允許干細胞維持其多能狀態(tài)并最大限度地減少轉染的細胞毒性的方案至關重要。
我們的支鏈兩親性肽膠囊(BAPC™)克服了脂質體載體的問題,有助于最大限度地減少轉染干細胞的壓力。這與誘導多能干細胞(iPSCs)尤其相關,它們對環(huán)境變化非常敏感,對壓力反應不佳。
將熒光激活細胞分選 (FACS) 分選的干細胞(輻射敏感細胞)培養(yǎng) 6 小時,并與 BAPC 和 Atto 633 一起孵育過夜。然后用固定在 4% FFA 中的培養(yǎng)基洗滌細胞兩次。 DMSO 處理的細胞用作陰性對照。在上圖中,比例尺代表 10 微米,白色箭頭代表 BAPC 陽性細胞。
Phoreus™ BAPtofect™-25 細胞轉染試劑盒最大限度地減少了干細胞轉染的壓力。由于 BAPC 是由合成的、天然存在的肽構成的,它們是自組裝的、水溶性的、對細胞無毒,并且不會觸發(fā)免疫系統(tǒng)反應。
Phoreus目前正在與行業(yè)合作伙伴合作開發(fā)iPSC干細胞轉染的新方案。 雖然這項初步工作已經成功地證明了干細胞對染色BAPC的有效吸收,但目前正在進行研究,以證明核酸的保護遞送導致干細胞成功轉化。這些新協(xié)議將促進CRISPR Cas-9的遞送,并指導RNA用于干細胞中的基因編輯,從而在細胞水平上對疾病產生令人興奮的新理解。