提取DNA后,大多數(shù)實(shí)驗(yàn)的下一階段需要已知濃度作為輸入材料。有許多方法可以測(cè)量DNA濃度,例如紫外線吸收,熒光染料和電泳。
DNA分光光度計(jì)通常用于測(cè)量濃度,本文將概述它們的工作原理以及使用原因。
DNA分光光度計(jì)的用途是什么?
分光光度法是一種重要的方法,用于一系列生化實(shí)驗(yàn),包括DNA,RNA和蛋白質(zhì)定量和質(zhì)量控制。在這些應(yīng)用中,樣品通常只能少量提供,最好進(jìn)行無(wú)損分析。使用微量分光光度計(jì)(有時(shí)稱為納米體積或納米滴分光光度計(jì))可最大限度地減少樣品定量的使用,通常只需要 1μL 樣品。
DNA分光光度計(jì)如何工作?
分光光度法是電磁光譜學(xué)的一種形式,涉及定量測(cè)量材料的透射或反射特性作為波長(zhǎng)的函數(shù)。DNA分光光度計(jì)使用檢測(cè)器記錄一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)的光束強(qiáng)度。
DNA分光光度計(jì)經(jīng)常用于紫外線,紅外線和可見輻射,但是,它們也可以詢問(wèn)電磁光譜的許多其他元素。波長(zhǎng)范圍(可以通過(guò)測(cè)試樣品傳輸?shù)念伾┦荄NA光譜儀的一個(gè)重要特征。此外,樣品透射百分比、樣品吸收的對(duì)數(shù)范圍以及偶爾的反射率測(cè)量百分比是某些應(yīng)用的重要特性。
在溶液中,DNA分光光度計(jì)可以測(cè)量堿基吸收的紫外線水平。DNA和其他核酸吸收峰值波長(zhǎng)為260nm的光。吸收的光量與樣品中DNA的濃度成正比。濃度是使用比爾-朗伯方程根據(jù)透射光量計(jì)算的。為了用分光光度計(jì)定量DNA,應(yīng)將DNA懸浮在溶劑中,并且分光光度計(jì)應(yīng)用溶劑空白以校正任何背景吸光度。
分光光度計(jì)是極其精確、準(zhǔn)確和復(fù)雜的設(shè)備,可用作實(shí)驗(yàn)室中的臺(tái)式或模型,或便攜式進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)工作。
DeNovix的DS-11系列在分光光度法領(lǐng)域具有革命性的性能。它結(jié)構(gòu)緊湊且易于使用,能夠提供具有熒光功能的全光譜紫外-可見分光度計(jì)分析,這意味著它非常適合快速核酸和蛋白質(zhì)定量。