進行細胞計數(shù)時要進行哪些步驟
更新時間:2022-09-20 點擊次數(shù):1296
常用的計數(shù)方法主要有手工計數(shù)(如利用改良牛鮑計數(shù)板)和細胞計數(shù)儀計數(shù)(經(jīng)費充裕組常備)。從原理來說,這兩種方法基本類似,大致是通過臺盼蘭或者熒光染料染色后,用肉眼或者用攝像機拍照后進行計數(shù),差別就是前者人累,且精準度和穩(wěn)定性較差;后者不累人,且精準度和穩(wěn)定性較好。
單細胞測序?qū)嶒灥牡谝徊绞菃渭毎麘乙旱闹苽?,而懸液制備中細胞計?shù)的準確性直接影響單細胞測序的數(shù)據(jù)質(zhì)量。
1. 計數(shù)板
用96%酒精沖洗計數(shù)板后,用干凈鹿皮擦凈,另擦凈蓋片一張;把蓋片覆在計數(shù)板上面,使之微微移向一側(cè),露出計數(shù)板臺面少許,以便滴加細胞懸液;
2. 染色
取吸管1 支,伸入培養(yǎng)瓶中,輕輕反復(fù)吹打細胞懸液使細胞重懸均勻后,立即吸細胞懸液少許,向另一離心管中滴入細胞懸液9 滴,再滴入臺盼藍染液1 滴,混勻,置2~3 分種;
3. 加懸液
把計數(shù)板平放在顯微鏡臺上,立即從計數(shù)板邊緣輕輕滴1~2 滴已染色的細胞懸液,使之充滿計數(shù)板和蓋片間空隙中;
4. 鏡檢
鏡下觀察可見細胞分散各處,健康細胞胞體完整,透明不著色,凡著色細胞均為不健康者。計算四角大方格內(nèi)的細胞數(shù);壓中線者只計算左線和上線者,右線和下線不計算在內(nèi)(即僅計算壓兩個邊的細胞)。
5. 接種培養(yǎng)
通過計數(shù)測知懸液中細胞數(shù)后,可根據(jù)實驗所需細胞數(shù)量向培養(yǎng)容器中接種。細胞接種數(shù)量隨實驗?zāi)康?、血清含量和細胞生物性狀而定;一般接種量在1~10x105細胞/毫升范圍,實驗周期短,希望細胞增殖較快時,接種量可大些。用含血清量大的培養(yǎng)液培養(yǎng)胚胎來源細胞、無限細胞系和惡性細胞系時,細胞接種數(shù)量不宜太大。